PRÁCTICA: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE UREA (10/01/18)

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE UREA


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- OBJETIVO

En esta práctica determinaremos la concentración de Urea a partir de una muestra de suero. Se trata de una reacción enzimática colorimétrica por el método de Berthelot.

- PRINCIPIO DEL MÉTODO

La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en amoniaco (NH4+) y anhidrido carbónico (CO2).

Los iones amonio reaccionan con salicilato e hipoclorito (ClONa), en presencia del catalizador nitroprusiato, para formar un indofenol verde:




Cuanto más cantidad de urea haya en la muestra, más cantidad de indofenol se formará (y más verde estará la muestra).

- SIGNIFICADO CLÍNICO

La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se forma en el hígado a partir de su destrucción.

Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencia cardíaca, hemorragias gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales. De ahí la importancia de su análisis y control.



- MATERIAL

  • Cubetas de espectrofotometría (de 1 cm de paso de luz)
  • Pipetas automáticas y puntas
  • Gradilla
  • Tubos de ensayo



- REACTIVOS





- MUESTRA

Suero



- APARATAJE

Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 580 nm

- PREPARACIÓN

El reactivo de trabajo se prepara disolviendo una tableta del vial R3 en el frasco R1, se tapa y se agita suavemente hasta que se disuelva.








- PROCEDIMIENTO

1. Una vez listo el RT pipetearemos en tubos de ensayo los siguientes compuestos:







2. Mezclamos e incubamos a 37 ºC durante 5 minutos.




3. Pipeteamos:





Obtenemos lo siguiente:




4. Mezclamos e incubamos a 37º C durante 5 minutos.


5. Leemos la absorbancia del patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo.



- RESULTADOS

Obtenemos los siguientes valores de absorbancia:

  • Blanco de reactivo: 0
  • Patron: 0,259 A




  • Muestra: 0, 386 A




- CÁLCULOS





(0.386 / 0.259) x 50 = 74,52 mg/dL de urea en la muestra

- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS


Los valores normales en suero están compredidos entre 15-45 mg/dL, lo que quiere decir que se encuentra fuera de los valores normales y por lo tanto puede presentar alguna patología asociada a la urea, nombradas al principio.

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