PRÁCTICA: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE CREATININA (11/01/18)

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE CREATININA

Resultado de imagen de creatinina

- OBJETIVO


Vamos a cuantificar y determinar la presencia de creatinina en suero mediante el método Jaffé, que es colorimétrico y cinético. 


- PRINCIPIO DEL MÉTODO


El ensayo de la creatinina está basado en la reacción de la creatinina con el picrato de sodio descrito por Jaffé.

La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran parte de las interferencias conocidas del método.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de creatinina en la muestra ensayada.


- SIGNIFICADO CLÍNICO



La creatinina es el resultado de la degradación de la creatina, componente de los músculos y puede ser transformada en ATP, fuente de energía para las células.

La producción de creatinina depende de la modificación de la masa muscular. Varía poco y los niveles suelen ser muy estables.

Se elimina a través del riñón. En una insuficiencia renal progresiva hay una retención en sangre de urea, creatinina y ácido úrico. 

Niveles altos de creatinina son indicativos de patología renal, por ello es muy importante analizarla.




- MATERIAL


  • Gradilla
  • Tubos de ensayo 
  • Pipetas automáticas y puntas
  • Cubetas de espectofotómetría




- MUESTRA

Suero problema




- APARATAJE


Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 492 nm (490-510)




- REACTIVOS






- PREPARACIÓN


Comenzaremos preparando el reactivo de trabajo. Para ello, mezclaremos volúmenes iguales de R1 (Reactivo Pícrico) y de R2 (Reactivo Alcalinizante).




- PROCEDIMIENTO
Pipeteamos lo siguiente en tres tubos de ensayo:





1. Comenzamos la práctica depositando 1 ml de RT en cada tubo de ensayo (blanco, patrón y muestra.




2. Una vez que tengamos el blanco, lo introducimos en el espectrofotómetro y lo ajustamos a 0.

3. A continuación, realizamos el patrón añadiendo 100 microlitros de patrón. En cuanto lo añadamos, mezclamos y leemos en el espectrofotómetro una vez transcurridos 30 segundos. Esperamos otros 60 segundos (90 segundos totales) y volvemos a medir.

4. Realizamos el mismo proceso anterior, pero en este caso con la muestra.




5. Una vez que hayamos leído la absorbancia del patrón y la muestra en el espectrofotómetro (a dos puntos), restamos las dos medidas (ΔA = A2 - A1)

- CÁLCULOS


  • Patrón

  1. A 30' = 0,012
  2. A 90' = 0' 043

ΔA = A 90' - A 30'; 0,043 - 0,012 = 0,0317 A

  • Muestra
  1. A 30' = 0,092
  2. A 90' = 0,112

ΔA = A 90' - A 30'; 0,112 - 0,092 = 0,02 A


Una vez obtenemos la diferencia entre las dos medidas calculamos la concentración.





Como ya hemos calculado la diferencia, simplemente la calculamos así:

(0,02 / 0,0317) x 2 = 1,26 mg/dl de creatinina en la muestra


Los valores normales de creatinina en suero son:

  • Hombres 0.7-1.4 mg/dL
  • Mujeres 0.6-1.1 mg/dL

Por lo que podemos deducir que nuestro paciente contiene un exceso de creatinina en suero, pudiendo sufrir alguna patología renal.

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