PRÁCTICA: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE TRIGLICÉRIDOS (20/12/17)


DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE TRIGLICÉRIDOS




- PRINCIPIO DEL MÉTODO

Esta técnica se basa en un método enzimático colorimétrico (GPO-POD).

 Los triglicéridos incubados con lipoproteinlipasa liberan glicerol y ácidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por glicerolfosfato deshidrogenasa y ATP en presencia de glicerol quinasa para producir glicerol-3-fosfato y adenosina-5-difosfato. El glicerol-3-fosfato es entonces convertido a dihidroxiacetona fosfato y peróxido de hidrógeno por glicerolfosfato deshidrogenasa.
Al final, el peróxido de hidrógeno reacciona con 4-aminofenazona y p-clorofenol, reacción catalizada por la peroxidasa dando lugar a la formación del compuesto quinona, el cual es de un color rojo-rosáceo.
Captura.JPG

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de triglicéridos presentes en la muestra ensayada.

- SIGNIFICADO CLÍNICO

Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula y que al igual que el colesterol, son transportados a las células del organismo por las lipoproteínas de la sangre.


Una dieta alta en carbohidratos y grasas saturadas puede elevar los niveles de triglicéridos. A diferencia del colesterol (que su aumento indica claramente riesgo cardiovascular), el aumento de triglicéridos en sangre es relativamente inespecífico.


Se atribuye a diversas dolencias, como ciertas disfunciones hepáticas (cirrosis, hepatitis, obstrucción biliar) o incluso diabetes mellitus. De ahí la importancia de estas determinaciones.


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- MATERIAL



  • Pipetas automáticas con sus respectivas puntas
  • Cubetas para espectrofotometría
  • Tubos de ensayo
  • Gradilla


- APARATAJE


Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 505 nm.

- MUESTRA


Suero o plasma



- REACTIVOS



 Captura2.JPG






- PREPARACIÓN

Comenzaremos preparando el reactivo de trabajo. Como hasta ahora, disolveremos el contenido de un vial de R2 enzimas en un frasco de R1 Tampón.


- PROCEDIMIENTO


1. Se preparan tres cubetas, las cuales se etiquetan como blanco, patrón y muestra
 Captura3.JPG
                      

 2. Lo mezclamos y lo dejamos incubar 5 minutos a 37ºC.

3. Leemos la absorbancia del patrón y la muestra frente al blanco de reactivo, midiendo a una longitud de onda de 505 nm y ajustando a 0 el espectrofotómetro con agua destilada.


- RESULTADOS

Obtenemos los siguientes valores de absorbancia:
  • Blanco: 0
  • Patrón: 0,333 nm
  • Muestra: 0,111 nm
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- CÁLCULOS


 Captura4.JPG
(0,111/0,333) x 200 = 66,7 mg/dl de triglicéridos en la muestra.

- VALORES DE REFERENCIA

  •  En hombres: 40-160 mg/dL
  •  En mujeres: 35-135 mg/dL 

Esto quiere decir que nuestra muestra se encuentra dentro de los valores normales de triglicéridos en sangre.

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