PRÁCTICA: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL COLESTEROL (20/12/17)

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL COLESTEROL





- OBJETIVO


Vamos a analizar el colesterol a través del método CHOD-POD, que es un método enzimático y colorimétrico.


- PRINCIPIO DEL MÉTODO


 El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado según la reacción siguiente:
Captura1.JPG


La presencia de colesterol dará como resultado final de la reacción un producto denominado quinonimina, que será de un color rojo-rosáceo. Por lo tanto, la intensidad del color formado será proporcional a la concentración de colesterol de la muestra.

- SIGNIFICADO CLÍNICO

El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del organismo. El hígado produce naturalmente todo el colesterol que necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas hormonas.
La determinación del colesterol es uno de las herramientas más importantes para el diagnóstico y clasificación de las lipemias (exceso de lípidos en sangre). El aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular.


- MATERIAL


  • Pipetas automáticas con sus correspondientes puntas
  • Cubetas de espectrofotometría
  • Tubos de ensayo
  • Gradilla

IMG-20161105-WA0022.jpg


- APARATAJE
Espectrofotómetro para realizar la lectura a 505 nm


- MUESTRA
Suero o plasma


- REACTIVOS


Captura.JPG


- PREPARACIÓN

Preparamos el reactivo de trabajo, disolviendo el contenido de un vial R2 Enzimas en un frasco de R1 tampón.

- PROCEDIMIENTO

1. Pipeteamos en una cubeta:


Captura2.JPG



Obtenemos lo siguiente:




2. Mezclamos e incubamos 5 minutos a 37ºC


3. Leemos la absorbancia del patrón y la muestra (a una longitud de onda de 505 nm), frente al Blanco de reactivo. Para ello ajustamos a 0 el espectrofotómetro con agua destilada. También podemos ajustarlo a 0 directamente con el blanco de reactivo y así no habría que restárselo en la fórmula (técnica que realizamos).


IMG-20161105-WA0028.jpg


- RESULTADOS


Obtenemos los siguientes valores de absorbancia:

  • Blanco: 0
  •  Patrón: 0,372 nm
  • Muestra: 0,301 nm

- CÁLCULOS


Captura3.JPG


(0,301/0,372) x 200 = 161, 83 mg/ dl de colesterol en la muestra

- VALORES DE REFERENCIA

Evaluación del riesgo:

  • Menos de 200 mg/dL: Normal
  • 200-239 mg/dL: Moderado
  • Mayor de 240 mg/dL: Alto

Por lo tanto podemos deducir que nuestro suero problema se encuentra dentro de los valores normales.


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