PRÁCTICA: HDL COLESTEROL P (16/01/18)


REACTIVO PRECIPITANTE DE HDL COLESTEROL



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- PRINCIPIO DEL MÉTODO

Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y baja densidad (LDL) del suero o plasma, se precipitan con fosfotungstato en presencia de iones magnesio. Tras la centrifugación, el sobrenadante contiene lipoproteínas de alta densidad (HDL). La fracción de HDL colesterol se determina utilizando el reactivo enzimático de colesterol total.

- SIGNIFICADO CLÍNICO


El colesterol transportado por las lipoproteínas de alta densidad (HDL) a menudo se denomina "colesterol bueno", ya que niveles elevados están relacionados con un menor riesgo cardiovascular.
Un nivel bajo de colesterol HDL es considerado uno de los principales factores de riesgo cardiovascular.


- MATERIAL


  • Micropipetas y puntas
  • Cubetas de espectrofotometría 
  • Tubos eppendorf
  • Tubos de ensayo

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- MUESTRA

Suero problema

- APARATAJE


  • Espectrofotómetro
  • Centrígufa

- REACTIVOS
R1
Reactivo precipitante
Ácido fosfotúngstico              14 mmol/L
Cloruro magnésico                  2 mmol/L
R2
Pat. Prim. Ac. HDL                  50 mg/dL
Colesterol CHOD-POD







- PROCEDIMIENTO


1. En primer lugar, mezclaremos 1 ml de muestra con 100 microlitros de reactivo precipitante

2. Dejamos reposar 10 minutos a temperatura ambiente.

3. Centrifugamos 2 minutos a 1.200 r.p.m.

4. Recogemos el sobrenadante y lo introducimos en un tubo de ensayo

5. Mezclamos 10 microlitros de la muestra y 1.000 microltros de reactivo de trabajo en un tubo de ensayo

        


5. Preparamos el blanco y el patrón.

6. Lo mezclamos bien y lo dejamos incubar unos 5 minutos a 37ºC, para que se produzca la reacción, la cual formará un compuesto coloreado rojizo.



6. Pasamos a medir la muestra y el patrón en el espectrofotómetro, a una longitud de onda de 505 nm.




- RESULTADOS

  • Absorbancia blanco: 0 A 
  • Absorbancia de la muestra: 0,079 A
  • Absorbancia patrón: 0,648 A



- CÁLCULOS

[(A Muestra - A Blanco)/ (A Patrón - A Blanco)] x 200 

(0,079/0,648) x 200 = 24,38 mg/dL

- NOTA

El valor obtenido tras medir la absorbancia de la muestra es muy bajo, por lo que debo repetir el procedimiento.

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