PRÁCTICA: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LDH (25/01/18)







DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LACTATO DESHIDROGENASA 



Resultado de imagen de LDH



- INTRODUCCIÓN


La diferencia con el resto de prácticas es que esta determinación es cinética, es decir, medirá la absorbancia a diferentes intervalos de tiempo, por lo que necesitaremos un espectrofotómetro capaz de realizar medidas cinéticas. 
Al ser una reacción donde a partir de NADH se forma NAD, la absorbancia es descendente. 
En una reacción donde se forme NADH a partir de NAD la absorbancia sería ascendente, al igual que en las colorimétricas. 

- PRINCIPIO DEL MÉTODO

La LDH cataliza la reducción del piruvato por el NADH, según la siguiente reacción:




La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio determinado fotométricamente es proporcional a la concentrción catalítica de LDH en la muestra ensayada.

- SIGNIFICADO CLÍNICO

La LDH es una enzima distribuida por todo el organismo humano. Las mayores concentraciones se encuentran en el hígado, corazón, riñón, músculo esquelético y eritrocitos.

El nivel de LDH en suero se eleva en pacientes con enfermedades hepáticas, infartos de miocardio, alteraciones renales, distrofias musculares y anemias.



- REACTIVOS






- MUESTRA

Suero sanguíneo

- MATERIAL

  • Micropipetas y puntas
  • Cubetas de espectrofotometría
  • Gradilla

- APARATAJE

Espectrofotómetro

- PROCEDIMIENTO

1. Preparamos el espectrofotómetro para realizar una técnica cinética.

2. Ajustamos el espectrofotómetro con agua destilada

3. Seguidamente, echamos 50 microlitros de muestra al reactivo de trabajo (3 ml) y mezclamos

4. Leemos la absorbancia inicial de la muestra y la absorbancia de la muestra cada minuto durante 3 minutos, por lo que tendremos 4 medidas:


A1: 1,777 A
A2: 1,763 A
A3: 1,748 A
A4: 1,732 A

5. Por último, una vez tengamos los datos, calculamos el promedio del incremento de absorbancia por minuto.

- RESULTADOS


1 - 2 = A; A = 0,014

2 - 3 = B; B = 0,015

3 - 4 = C; C = 0,016

Media = (0,014 + 0,015 + 0,016)/3 = 0,015

Ahora multiplicamos el valor de la media por el factor proporcionado por el protocolo:


0,015 x 9690 = 145,35 U/L


- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Es un valor que está por debajo de los valores de referencia ( 230-460 UI/L), aunque esta prueba aislada no tiene significación clínica.






















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